Carbapenemresistensgen (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Produktnavn
HWTS-OT045 Carbapenemresistensgen (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) Detektionskit (Fluorescens-PCR)
Epidemiologi
Carbapenem-antibiotika er atypiske β-laktam-antibiotika med det bredeste antibakterielle spektrum og den stærkeste antibakterielle aktivitet. På grund af dets stabilitet over for β-laktamase og lave toksicitet er det blevet et af de vigtigste antibakterielle lægemidler til behandling af alvorlige bakterieinfektioner. Carbapenemer er yderst stabile over for plasmidmedierede udvidede spektrum β-laktamaser (ESBL'er), kromosomer og plasmidmedierede cephalosporinaser (AmpC-enzymer).
Kanal
| PCR-blanding 1 | PCR-blanding 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Intern kontrol | Intern kontrol |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Tekniske parametre
| Opbevaring | ≤-18 ℃ |
| Holdbarhed | 12 måneder |
| Prøvetype | Sputum, rene kolonier, rektal podning |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0% |
| LoD | 103CFU/ml |
| Specificitet | a) Kittet detekterer de standardiserede negative virksomhedsreferencer, og resultaterne opfylder kravene i de tilsvarende referencer. b) Resultaterne af krydsreaktivitetstesten viser, at dette kit ikke har nogen krydsreaktion med andre respiratoriske patogener, såsom Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, respiratorisk adenovirus, Enterococcus eller prøver, der indeholder andre lægemiddelresistente gener CTX, mecA, SME, SHV, TEM osv. c) Anti-interferens: Mucin, minocyclin, gentamicin, clindamycin, imipenem, cefoperazon, meropenem, ciprofloxacinhydrochlorid, levofloxacin, clavulansyre og roxithromycin er udvalgt til interferenstest, og resultaterne viser, at de ovennævnte interfererende stoffer ikke har nogen interfererende reaktion på detektionen af carbapenemresistensgenerne KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM og IMP. |
| Anvendelige instrumenter | Applied Biosystems 7500 realtids-PCR-systemer QuantStudio®5 realtids-PCR-systemer SLAN-96P realtids-PCR-systemer (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) LightCycler®480 realtids-PCR-system LineGene 9600 Plus realtids-PCR-detektionssystem (FQD-96A，HangzhouBioteknologi) MA-6000 kvantitativ termisk cykler i realtid (Suzhou Molarray Co., Ltd.) BioRad CFX96 realtids-PCR-system BioRad CFX Opus 96 realtids-PCR-system |
Arbejdsgang
Mulighed 1.
Anbefalet ekstraktionsreagens: Makro- og mikrotest General DNA/RNA Kit (HWTS-3019-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (som kan bruges med Macro & Micro-Test Automatic Nucleic Acid Extractor (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) fra Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. Tilsæt 200 μL normal saltvand til thallusbundfaldet. Efterfølgende trin skal følge instruktionerne for ekstraktion, og det anbefalede elueringsvolumen er100 μL.
Mulighed 2.
Anbefalet ekstraktionsreagens: Nucleic Acid Extraction or Purification Reagent (YDP302) fra Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. Ekstraktionen skal startes i nøje overensstemmelse med trin 2 i brugsanvisningen (tilsæt 200 μL buffer GA til thallusbundfaldet, og ryst, indtil thallus er fuldstændigt suspenderet). Brug RNase/DNase-frit vand til eluering, og det anbefalede elueringsvolumen er 100 μL.
Mulighed 3.
Anbefalet ekstraktionsreagens: Makro- og mikrotestprøvefrigivelsesreagens. Sputumprøven skal vaskes ved at tilsætte 1 ml normal saltvand til det ovennævnte behandlede thallusbundfald, centrifugeres ved 13000 o/min i 5 minutter, og supernatanten kasseres (behold 10-20 µL supernatant). For ren koloni og rektal podning tilsættes 50 μL prøvefrigivelsesreagens direkte til det ovennævnte behandlede thallusbundfald, og de efterfølgende trin skal ekstraheres i henhold til brugsanvisningen.
